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阿尔新蓝、阿尔新蓝-茜素红染色
1、阿尔新蓝染液
100%乙醇80ml
冰醋酸20ml
alcian blue 8 GX0.1g
充分混匀溶解后,37°静置过夜。
2、无酸双染色剂(阿尔新蓝—茜素红S)
A液:alcian blue 8 GX用于软骨染色。
首先将阿尔新蓝粉末溶解到50%的乙醇中,37°孵育并摇匀,溶解后再加入95%乙醇是浓度达到70%。100ml
A液=5ml 0.4%阿尔新蓝+70ml 95%乙醇+5ml1MMgCl2+20ml dH2O。
B液:0.5% alizarin red S,0.5galizarin red S粉末溶解于100ml蒸馏水中。
混合液中试剂终浓度:0.02% alcian blue,40-60 mM MgCl2,70%乙醇。
在使用前,取10ul的B液和1ml的A液混合使用(现配现用)。
3、斑马鱼整体软骨-骨骼无酸双染色
取各处理组幼鱼,分装于1.5 ml离心管中,每管约50只幼鱼。
1)幼鱼组织固定
麻醉幼鱼,使用4%的中性甲醛缓冲液(由PBS配制)或使用2%PFA固定在1.5ml离心管中,室温振荡10min,放置2h。吸走固定液,并用PBS清洗2次,使用50%乙醇脱水。
2)染色
去除50%乙醇,加入1ml阿尔新蓝-茜素红S染色液到离心管中,质问轻微振荡过夜。
3)漂白
漂白以去掉幼鱼表面色素。漂白液现配现用,由等量的3%H2O2和2%KOH混合组成,终浓度为1.5%H2O2和1%KOH溶液。染色管中,在去掉染色液后,加入1ml水,倒置混合吸去液体。再新加入1ml漂白液,并将离心管盖打开,室温放置5)